你是直接用primer5设计的引物吗？有时候时会遇到你说的问题，你可以在软件设计出来的基础上，手动的把你的引物移动几个碱基，可以减少一些二聚体或错配，而且，软件给出来的这些结果都只是计算值，你实际应用的时候，退火温度都要五六十度了，即使有部分二聚体在这个温度下也打开了，如果害怕出问题，你可以针对同一转录组多设计几对引物，然后选一组最好的用
LS说得很对
1.
你可以手动改动几个碱基，降低引物里面的dimer，主要是3'端没有dimer就好。
2.
错配问题，可以用taqman探针来检测，但是很贵，实在设计不出来再用。
3.
可以多设计几对，然后做个引物测试，挑选出几对好的，再做QRT。
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