你可以使用全血DNA试剂盒
可以无需事先分离去除红细胞
无需蛋白酶K消化步骤,适用于从全血中分离纯化最多达15 μg总DNA.·15分钟内即可完成血液总DNA的制备.
无须事先分离去除红细胞及蛋白酶K消化步骤.
可从新鲜或者是冷冻的全血、溶血的全血、唾液、 细胞悬浮液等标本中分离纯化总DNA.
核酸纯化柱可最大吸附15μg 总DNA.
起始样品体积:200 μl- 400 μl全血.
彻底清除血样中的PCR抑制物,可使用多至1/2反应体系体积的模板进行扩增.
所需仪器:可适合2 ml离心管使用的离心机.
原理:全血样品经裂解液溶解后,用沉淀液沉淀血红蛋白.柱纯化核酸技术过滤除去残留的血红蛋白,吸附在纯化柱上的总DNA经Buffer WA和Buffer WB洗涤后,可彻底清除残留在纯化柱上的杂质及PCR抑制物.纯化柱上的总DNA可直接用BufferTE或水洗脱,并可立即用于各种分子生物学实验.
步骤:在400 μl全血中加入300 μl Buffer L1溶解全血释放DNA,再加入300μl Buffer L2沉淀血红蛋白,离心取上清加入纯化柱中,经过结合、清洗步骤去除残留的杂质后,DNA即可被TE溶液洗脱下来.
有的,直接买试剂盒提取,省下一大部分的时间。
1. 请自行准备:无水乙醇、PBS、1.5ml离心管。
2. 取出BIOG析出液和BIOG洗涤液,按以下操作:
a) BIOG析出液:4.5mL加入25.5mL无水乙醇
b) BIOG洗涤液:9mL加入21mL无水乙醇
c) 配制好的析出液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。
3. 取1.5ml离心管,加入1mLBIOG结合液,再加入0.2mL已经解冻或新鲜的血液,轻轻振荡混匀,室温放置5分钟,5,000 rpm 离心 3分钟。
4. 彻底弃上清,加入50μLPBS,悬浮沉淀;加入200 μLBIOG裂解液,20μLBIOG消化液,充分振荡混匀,56℃水浴10 分钟至细胞完全裂解。
5. 加入500μL析出液,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响DNA的提取与后续实验。
6. 将BIOG吸附柱放入BIOG收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,静置2分钟,12,000 rpm 离心1分钟,弃收集管内废液。
7. 将吸附柱放回收集管内,加500 μL洗涤液至吸附柱内,12,000 rpm 离心1分钟,弃收集管内废液。
8. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 离心2分钟,离去残留的洗涤液。
9. 取出吸附柱,放入新的1.5 mL 离心管内,加入50-200 μL洗脱液,静置3分钟,12,000 rpm 4℃ 离心2分钟,收集DNA溶液。提的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。