雄龟的尾巴比较细长，基部较粗。 泄殖腔离腹甲底部较远。 雌草龟的泄殖腔和腹甲底部间的距离比较远。 这种方法鉴别雌雄比较精确, 但用来鉴定幼龟时，会有失误，因为幼龟发育不完全，之间的差别还不明显。
其他雌雄间体型的差别： 雄草龟的腹甲上会有轻微的凹痕， 母龟则是平坦的。 雄草龟随着年龄的增长。身上的颜色越变越深，大部分雄草龟成年后颈部的斑纹会消失，全身变成墨黑色。 这也是草龟被叫做“乌龟“的原因。 母草龟的体色一般终生不变， 体型也比同年纪的雄龟稍大。
雌龟与雄龟在外形上有较为明显的区别:雄龟个体较小，龟壳黑色，躯干部长而薄，尾长柄细，具有特殊臭味;雌龟个体较大，龟壳棕黄色，纵棱显著，躯干部短而厚，尾短柄粗，没有特殊臭味。更为可靠和准确的鉴别方法是:在乌龟的繁殖季节，抓住成龟，当它的四肢和头尾皆欲缩人壳内时，用手指使劲住它的头及四肢，不让它有时间呼吸，此时乌龟泄殖孔内即排出副膀胱水，然后生殖器慢慢地外突，若只向外突出纵列的皱纹内壁者为雌龟;如有一充血膨大呈褐紫色的交接器外突者则为雄龟，如果在交配季节，雄龟还会有乳白色的精液排出。
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