Western 实验中常用的显色方法有哪些?为什么发文章都用ECL方法?

2025-04-05 09:09:52
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Western是初步鉴定蛋白质最方便也是最通用的方法。显色方法主要有:放射自显影,底物化学发光ECL,底物荧光ECF,底物DAB,现在常用的有ECL和底物DAB,目前发表文章通常用ECL,只要买现成的试剂盒就可以,操作简单,二抗用HRP标记,底物为过氧化物+鲁米诺,如果遇到HRP即可发光,可使胶片曝光,洗出条带。在凝胶图像分析仪上进行灰度扫描,比较目的蛋白与内参照蛋白的灰度值,可以半定量分析。我们实验室就一直用这种方法,开始用的millipore的试剂盒,后来用的炎熙生物的极敏型ECL试剂盒,灵敏度很高。对一些表达不高的蛋白非常适用。