，pst1酶切处理目的片段和puc19载体（可以继续用碱性磷酸酶处理酶切后的puc19，防止载体自连，用该连接产物转化大肠杆菌感受态。） 2，用T4连接酶连接酶切后的puc19和目的片段。 3，涂布于氨苄抗性平板 4，挑取单菌落进行PCR验证目的片段，测序
