如何从发酵液中分离一种未知的物质
考虑几面：
1）初步确定发酵液性份性质,HPLC显示都极性非强说明水溶性,足判断性质；查阅质料,看相关菌种产性物质种类,设计相关实验进行初步验证,比抗素能产抑菌圈,蛋白酶能水解蛋白质底物形透明圈等相关实验；
2）根据性性质设计离纯化；
3）发酵液预处理,首先要滤除菌体等发酵液能溶解杂质,产色素先除色素,免干扰面离程；同要根据性性质性进行定浓缩处理,再根据要用柱进行必要处理,比透析盐等,同要注意预处理程尽量保持性性.
离菌体,先用各种机溶剂甲醇、氯仿等进行萃取,检查萃取液与沉淀物质性,确定性致性质；先用盐析,用硫酸氨等进行盐析,测试性.些工作完,放柱进行初步纯化,收集性物组.必要,低压色谱柱或高压色谱.收集性峰,般经高效液相色谱,比较纯.
性物质极性强,需要换根离极性物质柱,像C18或凝胶柱.
发酵液预处理固液离
根据性物质许范围,采取酸化、加热、滤、絮凝、离等.
提取(离浓缩)
经采用化萃取、树脂吸附、沉淀等.
精制(纯化)
采用结晶、脱色、色谱层析等.
外提取步骤应用沉淀、吸附等用于品纯化.
提取选择
1.产品基本理化性能,化结构、化合物溶解度、极性、pK值、官能团反映等.
2.化合物稳定性,耐受pH范围、耐受温度条件、光照、氧化等.
外,离纯化程值提及,尽能避免二污染.离纯化程使用水要求离,机溶剂要求高纯级,使用树脂应该经预处理除其残留杂质等.
Hplc纯化试试调节pH值,适降低乙腈或甲醇量
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