1．1 仪器
1．岛津UV一120型紫外一可见分光光度计；2．XW一80型旋涡混合器；3．FZ一2恒温振荡
器；4．岛津TB-85型恒温水浴槽
l_2 试剂
1．0．1 DDB溶液：称取0．1 g DDB 溶于100 m1 1 mol／L HCI中。
2．硒标准溶液：称取高纯SeO：1 40．5 mg，溶于1 mo|／L HCI中．定容至l00ml，其浓度
为1．00 mg／L。4℃贮存，用时稀释。
3．混合酸：优级纯硫酸、高氯酸以3：4(v／v)配制，分解样品用。
所用水为一次石英蒸馏器重蒸去离子水．电导率< l×lO cm
1．3 一般操作步骤
1．3．1 土壤垒硒量的测定称取1 g左右的土样于1 O0mJ消煮管中。加入混合酸7m1．5
NaMoO一1 ml，加水3 ml，油浴加热消煮。控温在180 C，消煮至残渣变白为止。冷后，加水稀释
至20～30 mJ，振摇．过滤于50ml容量瓶中 在滤液中加入磷酸3m1．1 mol／L草酸3 ml和
l0 盐酸羟胺3ml，摇匀。50C水浴1 0rain 然后，再加入0．1 DDB 2ml，50℃水浴30rain。
冷后加入4 ml正己烷。振摇l rain，取有机相以正己烷为参比，于335 nm波长处测量其吸光
度。
I．3．2 土壤中各形态硒的测定 。]
硒的分级方法为：
(I)可溶态(Ft)：0．2 mol／L K—SO ，pH6．6提取。
(2)交换态(F!)：0．1 mol／L K bIPO‘ pH6．6提取
(3)氨水提取态( )：0．05 mo|／L NH3·H 2O提取。
(4)盐酸提取态( )：6 mol／L HCI提取。
(5)残留态( ) 、
称取5 g过20目筛的土样，放入50mI离心管中．按水土比(5；1)依次加入各提取剂连
续提取 在室温(25C)下，依次振荡16 h，24 h。16 h，16 h，然后在高速离心机上离心(I 200
g)8 min．收集上清液，再用5 ml水洗一次．洗液离心后台并在一起，加入混酸4～7 m1．5
NaMoO4 1 ml，油浴消化 用分光光度法测定。
DDB由奉宴验室合成，成品经薄层层析、紫外、红外和元煮分析．纯度属高纯试剂级。
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· 90· 南京农业大学学报 lB卷
2 结果和讨论
2．1 最佳测试条件的选择
2．1．1 测量波长的选择4，6一二溴苤硒脑在正己烷溶剂中，以uv一120型分光光度计扫描
22O～400 nm，其吸光光谱曲线如图1所示，发现最大吸收峰位于渡长335 nm处(以正己烷
为参比，比槽厚度1 cm)。
2．1．2 介质及酸度 试验选用盐酸为介质，当盐酸酸度为0．8～5 mol／L时，吸光度Am值
基本不变(图2)
(se：1 5 uE／mI)
图l 正己烷中Se-DDB的吸收光谱
Fig．1 S* c‘ra Se—DDB complex
2．1．3 显色剂的选择和用量经试验，2，
3一二氨基萘(DAN)，3，3，一二氨基联苯胺
(DAB)，4一氨邻苯二胺，4一硝基邻苯二胺和0
DDB五种显色剂，前四种有的需要将消化液 0
的pH值调到特定酸度，否则显色反应受阻， ：，
有的与硒形成络合物的萃取率低。DDB与硒
反应不需要调节消化液酸度，其Se—DDB络
合物可被正己烷完全萃取，萃取率大于
99 故选用DDB为络合剂。在20～30 ml V／ml
消化液中(酸度约1 mol／L)加入0．5 DDB
溶液1 ml即可反应完全(图3)。 (s ：2 pg／m1)
2．1．4 显色反应的温度和时间 在室温下 图3 显色剂DDB的用量
络合反应至少需要170 min才能反应完全， Fig．3 Effect the~,IOuI Lt of developer
而用50C水浴，在30 min即可反应完全(图d)。
2．1．5 反应的稳定性将4，6一二溴苤硒脑的正己烷溶液在密闭溶器中放置120 mln，吸光
度值Am无显著变化(图5)
2．1．6 干扰的消除—— 掩蔽剂选择对土样消化液采用H sPO·+H C O·+NH OH·HC1代
替EDTA+NH OH·HCI，掩蔽干扰所测结果满意(表1)
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l期 周溶等： 以3，5-二溴穹fI苯二胺为显色剂用分光光度法测定土壤中微量硒 ·9l·
《
0j．一3
圈4 显色反应与时阃和温度的关系
Fig．4 Relatiooship betw~n developing time and mD目 “-
2．2 方法的精密度和准确度
2．2．1 用紫外分光光度法测定土壤标准参
考物GSS一6的结果从表2可见，GSS一6标
准土壤样品测定结果的标准差为0．01 4，变
异系数为1．12 ，所得结果与标准值接近。
2．2 2 工作曲线绘制工作曲线所依据的
两个变量的线性如何，决定着工作蛆线的质
量，进一步影响所得结果的准确度。硒含量与
吸光度的关系见表3。从表3可得硒工作溶
液的浓度与吸光度的回归方程： 一0．2z
一3．4×10_ r：0．996，可见工作曲线线性
关系良好。
0
0
《0
．o
图5 稳定性试验
Fig．S S~lbll[ty of the reaction
表1 不同掩蔽剂消除干扰的结果
Table 1 Efect ofmu kt~g_掣啦乜
土壤标准样品GSS-6舍硒量为1．3{±0．1 pg／g
The se~ontcm of 5hu'dafd soil samp~G 一6 is I．34士0．1 ／g
查NYT 1104-2006 土壤中全硒的测定，百度文库里面就有
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