PCR跑胶，目的条带很亮，但是边沿不清楚，前后有拖尾现象，请教各位是什么原因？

博凌科为-为你解答：1模板可能有降解，建议避免反复冻融，放置时间不能太长。模板的质量是最重要的。2抽提RNA时有污染，包括基因组DNA污染和蛋白质污染，需重 做抽提。3提高退火温度，减少非特异性扩增。4减少循环次数，减少非特异性扩增。5电泳缓冲液时间太长，ph值和盐离子浓度明显 改变。6电泳时电压不能太高，8V/cm。7一般来讲，基于promega和TaKaRa的PCR反应体系中，Mg和dNTP的浓度是相 匹配的，不需改动。8 加样量过大。过多的量会造成加样孔超载，从而导致拖尾和弥散，对于较大的DNA此现象更明显。9制胶过程中胶孔没 制好。10 EB没有冲洗干净。11模板混有基因组DNA，或模板中混有蛋白。12非特异反映。引物设计的不好，非特异，这种情 况容易出现非特异扩增造成有非特异性扩增带或拖尾现象。13电泳液用久了不换，电泳胶脏了 。14扩增的条件不合适，一般退火温度低时容 易使引物在非特异位置结合引发扩增反应造成拖尾。针对以上情况，可以先提高退火温度试试，如果实在不行，再看看引物是不是合适。如果 内参可以扩出来，只能说明程序可能是适合的，但不能完全说明体系合适。体系内的各组分，如模板、dNTP、Mg离子、引物等都可能造成拖尾。先得考虑换了 那种成分后出现了拖尾，逐项试验。引物当然是最重要的因素，但绝非造成拖尾的唯一原因。而且，一般而言，拖尾不会是引物的问题，尤其是已经被用过证明能扩 出特异片段的 引物，更不可能是它的问题了。先不要加Taq酶，等到其他东西都加完了以后，放到PCR仪上去，到那时再加，马上开启PCR程序试试。检 查一下你的dNTP的量够不够。适当减少2～3个循环试试，可能会有效果。