很多野生型大肠杆菌非重组酶缺陷 非内切酶缺陷 等
所以不是转不进去 是质粒在这些宿主中很不稳定
不一定
所以需要通过质粒上的标记基因检测
影响转化效率的因素很多，主要有：感受态细胞制备的质量、受体菌生长期（大肠杆菌在对数生长期易产生感受态）、质粒的大小和构型、所用试剂的纯度、接种前菌种的保藏方式、冰浴时间（延长冰浴时间可略微提高转化率）、器皿的清洁度、化合物及无机离子（Rb+、Mn+、二甲基亚砜能适当提高转化率）、质粒与细胞个数的比例（质粒与细胞个数比例在1:1以下时，转化率随着加入DNA的量增加而呈线性增加）。
（1）细胞生长状态和密度。密度不足或过高会使转化率下降。
（2）质粒DNA的质量和浓度。用于转化的质粒DNA应主要是共价闭环DNA。转化率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，量过多货体积过大时，转化率下降。
（3）试剂的质量。
（4）防止杂菌和其他外源DNA的污染。
（5）根据所需质粒DNA的特性，设置相应的选择性培养基进行筛选，有的可能还需进行多补筛选。
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