动物细胞培养的一般步骤是什么？

一、复苏
1.把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
2.把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。
3.把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。
4.标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。
5.3天换一次培养基。
二、传代
1.培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
2.把原有培养基吸掉。
3.加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化1-2分钟。
4.细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。
5.用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。
6.把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。
7.倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。
8.根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。
三、 冻存
把细胞消化下来并离心（同上）。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。
冻存液的配制： 70%的完全培养基 20񳀐%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

要注意的就是无菌操作！

动物细胞培养的过程一般分为（分离）和（培养）两个阶段，细胞培养需要理想的气体环境，多数细胞需要氧张力才能生长。氧含量应略低于大气状态，二氧化碳为细胞生长所需也是细胞代谢产物，与维持培养基PH值相关。
幼龄动物--->剪碎组织--->胰蛋白酶处理--->细胞培养
其中细胞培养又包括原代培养和传代培养