首先 pH值对结果很有影响,pH值保证你的样品处在分子状态(即极性最小的状态),这样便于反相色谱分离,所以你调pH值时候一定要准确。其次你冲柱子的方法是对的,用过缓冲盐后柱子必须以高水相冲洗,一般 1mL/min 冲30min以上,再换高有机相冲,然后保存在高有机相中。冲柱子的时候你可以把乙腈换成甲醇,甲醇便宜些且对仪器保护要好些。基线不稳可能是进了气泡,你做实验之前排了气泡没?流动相过膜、脱气没?进样量似乎太大?一般都是进20uL(如果行业标准是50uL 你就按行业标准)柱子长度对分离影响不大,只是物质出峰时间会稍稍提前。柱温室温,一般室温为25℃,液相色谱柱温一般对分离影响不大。不知道你用的是什么牌子的柱子,可否告知型号?