对于光化学或光生物学的反应系统，每单位时间给与具有一定光量子数（或能量）的单色光时，用光谱来表示的反应速度对波长的依赖关系。也可用引起一定量反应所需要的光量子数的倒数对波长所作的图来下定义。在求作用光谱的时候，最好在反应量（或速度）与光量子数（或每单位时间的数目）成比例的光强范围内进行。通过比较作用光谱和反应系统所包含的物质的吸收光谱，可以了解光化学或光生物学过程的机制。譬如，求得了光合成各过程的作用光谱，就知道了叶绿素在光化学过程中起核心作用，同时也知道由其他色素向叶绿素的能量转移是以高效率发生的等等。
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